2. 中间层：磁层，作用是与磁力架上的磁铁相互吸附，从而分离核酸与反应溶液，材料通常为Fe3O4；

3. 最外层：修饰层，一般为带负电的基团，如羧基材料。

磁珠分选原理

磁珠会优先抓取较大的核酸片段，在分选过程中，通过控制两轮磁珠的加入量来分选到所需要大小的文库片段。

第一轮加入磁珠，先结合体系中的大片段，在这一步弃去磁珠，丢掉大片段；

第二轮在第一轮所保留的上清中加入磁珠，磁珠与体系中余下体积中的大片段结合，弃去上清，丢掉小片段，两轮后就抓取到所需要的中间片段的核酸。

磁珠纯化原理

在磁珠Buffer中，DNA分子会由线性压缩成球状，暴露出核酸骨架上大量的负电基团，与Buffer体系中的阳离子连接核酸和磁珠形成“阴离子-阳离子-阴离子”的盐桥结构，使DNA被特异性地吸附到磁珠表面。而当Buffer被弃除后，加入水性分子，会快速充分水化DNA，解除三者之间的离子相互作用，使吸附到磁珠上的DNA被纯化出来。

磁珠纯化操作过程

1. 磁珠平衡至室温后，涡旋震荡混匀；

2. 吸取所需磁珠至产物中，涡旋混匀震荡，或使用移液器轻轻吹打10次混匀；室温孵育5min ；

3. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后移除上清；

4. 保持PCR管始终置于磁力架上，加入200uL新鲜配置的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30s，弃除上清，重复一次；

5. 待酒精完全干后，加入水或TE Buffer进行洗脱，室温静置5min，待溶液澄清后移取上清至新的PCR管中。

磁珠纯化注意事项

1. 磁珠必须先在室温下静置30min，使用前进行涡旋震荡混匀；

2. 80%乙醇需要新鲜配置；

3. 加酒精时勿将吸附成团的磁珠吹散；

4. 磁珠晾干时一定要刚好，磁珠表面没有光泽，过干影响洗脱效率，晾干不充分会有酒精残留，影响后续实验。

关于欧易实验技术中心

欧易实验技术中心由一代测序、二代测序、三代测序、基因芯片、核酸抽提、定量、酵母文库、10X单细胞测序、微生物多样性等多个平台组成。现拥有Agilent、Affymetrix、Thermo、Roche、Covaris、ABI、Eppendorf、Rainin、BD、10X、BGI、pacbio等多家原厂高端设备，并先后获得美国Agilent公司、美国Affymetrix公司、美国Pacbio公司在中国的认证服务商资质。

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Echo 撰文

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